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人的胰岛素ELISA试剂盒Human insulin ELISA KIT
货号:HH-72
价格:¥4200.00/2600.00.00
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人胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒

 

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的胰岛素浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整如有产品包装破损或质量投拆,请在收到货一个月之内联系我们。

 

胰岛素简介:

胰岛素是糖代谢中最主要的激素之一。胰腺的ß细胞岛细胞产生胰岛素前体蛋白,前体蛋白被加工成C肽和胰岛素。它们以等摩尔浓度进入血循环中。成熟的胰岛素由A、B两条链组成。这两条链是通过两个二硫键桥接形成有功能的胰岛素分子。

血浆葡萄糖浓度的变化是胰岛素产生并分泌的最主要刺激因素,产生的胰岛素具有一些代谢调节作用。其最主要的作用是,将外周血中糖转运到肝脏中贮存起来。一些诸如肝糖生成障碍或在促进血糖升高的激素诸如胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质醇等作用下促进肝糖分解都可拮抗胰岛素的作用。

 

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中胰岛素的浓度。胰岛素捕获抗体已预包被于酶标板上,当同时加入标本或参考品和HRP耦连的抗人胰岛素抗体时,其中胰岛素不同位点会与捕获抗体和HRP耦连的抗人胰岛素抗体结合形成夹心复合物,锚定在固相载体板上,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂,若样本中存在胰岛素将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,胰岛素浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中胰岛素浓度。

 

人胰岛素定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

组分

规格(96T/48T)

人胰岛素预包被板

12条/6

标准品稀释液

10ml/5ml

人胰岛素标准品

2支/1支(冻干)*

HRP连接的抗体结合物

10ml/5ml

浓缩洗涤液 20×

30ml/15ml

TMB底物

10ml/5ml

终止液

5ml/3ml

封板胶纸

3/2

说明书

1

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作;

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可;

B.血清标本应是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;

C.血浆标本,推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测,

D.标本收集后请分装,冻存于-20℃,避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂;

3.标本应清澈透明,检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血,高血脂或污染的标本检测,否则结果将不准确。

 

 

注意事项:

1.试剂盒请保存在28℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶,请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

3.标准品复溶加样后,剩余部分请丢弃。

4.底物请勿接触氧化剂和金属。

5.加样时,请及时更换枪头,避免交叉污染。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要,在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

8.室温反应,请严格控制在25~28℃。

9.洗涤过程是至关重要的,洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时,检测抗体的孵育时间应适当延长。

 

检测前准备工作: 

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温25~28℃)平衡20分钟;每次检测后剩余试剂请及时于2~8℃保存。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)

3.如有5x标准品稀释液,请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)

4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使胰岛素终浓度达到200 mIU/L室温反应,请严格控制在25~28℃,静置15~20分钟后轻轻混悬(建议抽吸几次)待彻底溶解,用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(标准曲线取七个点,最高浓度为200 mIU/L,标准品稀释液直接加入作为0浓度.)

图片2.png 

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板:每孔洗涤液为300ul,注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

 

实验过程需自备的材料:

1.不同规格的加样枪及相应的枪头;   

2.酶标仪;

3.自动洗板机;                     

4.去离子水或双蒸水;

 

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3.分别将标本或不同浓度标准品(25ul/孔)加入相应孔中,快速加入HRP连接抗体工作液(100ul/)。用封板胶纸封住反应孔,室温25~28℃)孵育120分钟。

4.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入显色剂TMB100ul/孔,避光室温25~28℃)孵育10分钟。

6.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

 

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效,复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数

典型数值和参考曲线

浓度mIU/L

典型OD1

典型OD2

OD平均值

0

0.0957

0.1515

0.1236

6.25

0.2963

0.3653

0.3308

12.5

0.5215

0.6337

0.5776

25

0.7894

0.8764

0.8329

50

1.0825

1.1933

1.1379

100

1.4356

1.5614

1.4985

200

1.9482

2.0006

1.9744

人胰岛素参考标准曲线

图片1.png 

注意:本图仅供参考,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

 

灵敏度,特异性和重复性:

1.灵敏度:多次重复结果表明,最小检出量为1.54mIU/L。

2.特异性:与人的C肽,ProinsulinIGF-IIGF-II和大鼠胰岛素、小鼠胰岛素不反应,与猪、绵羊和牛的胰岛素分别有374%、48%和31%的交叉反应性。

3.重复性:板内,板间变异系数均<10%.

 

参考文献:

1FRIER, B.M., ASHBY, J.P., NAIRIN, I.M. and BAIRS, J.D. (1981).Plasma insulin, C-peptide and glucagon concentrations in patients with insulin-independent diabetes treated with chlorpropamide. Diab. Metab.. 7, 1, 45-49.

2Rudovich NN, Rochlitz HJ, Pfeiffer AF. (2004) Reduced hepatic insulin extraction in response to gastric inhibitory polypeptide compensates for reduced insulin secretion in normal-weight and normal glucose tolerant first-degree relatives of type 2 diabetic patients. Diabetes 53:2359-2365

3JUDZEWITSCH, R.G., PFEIFER, M.A., BEST, J.D:, BEARD J.C., HALTER, J.B. and PORTE D. Jr. (1982). Chronic chlorpropamide therapy of noninsulin-dependent diabetes augments basal and stimulated insulin secretion by increasing islet sensitivity to glucose. J. Clin. End. And Metab. 55, 2, 321-328.

4Riserus U, Vessby B, Arner P, Zethelius B. (2004) Supplementation with trans10cis12-conjugated linoleic acid induces hyperproinsulinaemia in obese men: close association with impaired insulin sensitivity. Diabetologia 47:1016-1019

5Gaines-Das, R.E. and Bristow, A.F. (1988) WHO International reference reagents for human proinsulin and human C-peptide. J Biol Stand 16:179-186

6 Lindstrom T, Hedman CA, Arnqvist HJ. (2002) Use of a novel double-antibody technique to describethe pharmacokinetics of rapid-acting insulin analogs. Diabetes Care 25:1049-1054


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