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如何提高细胞冻存率?

大家讲一个笑话某小师妹跟着师兄做细胞冻存实验,复制粘贴了每个步骤,结果复苏的时候还是死了一大片。好笑吗?哈哈哈,可是你们为什么要哭啊...

对于很多科研汪来说,细胞是最脆弱又重要的宝贝之一,承担着重要的实验数据希望。尤其是在冻存复苏的时候,经常会因为一些小细节导致问题。比如:

风水

出各种玄学状况的时候,污染物是毋庸置疑的源头,培养室的空气、培养箱内循环的空气、培养箱的层架以及显微镜的载物台和物镜都可能是污染源。

有就是你自己,进入无菌间后尽量不要说话,进入无菌间后尽量不要说话,进入无菌间后尽量不要说话。打开培养箱后绝对不能说话,打开培养箱后绝对不能说话,打开培养箱后绝对不能说话。

不要对着它念叨,要用你的心去感化细胞,重要的事情说三遍。

温度

慢冻快融是细胞冻存复苏的核心关键词之一。常见的是 -4℃ → -20℃ - 40℃→ -80℃ → 液氮,有着严格的梯度降温。

目前更多使用程序降温盒,将细胞冻存管放于盒内,之后再置于超低温冰箱,程序降温盒可控制每分钟下降1一定要避免温度原因导致细胞自取灭亡;除非使用了成分经过优化、经过严格测试的冻存液,才能免去程序降温这个繁琐的步骤。保存的时候也要保证整个细胞都是处于液氮的液面下方,避免温度对细胞存活的影响。

水土

解冻后的细胞要用和以前一样的培养液和血清。因为每一种细胞都有自己特定的,并且已经熟悉了的生长环境。突然使用不一样的培养液和血清,会造成细胞生长不良,甚至死亡。这和一个人突然离家千里,会水土不服是一样的道理。

除了操作中的各种小细节,还有一个实验雷区,就是配制细胞冻存液。常见的冻存液配制要遵循培养基 + 血清 + DMSO 的成分要求,根据细胞实际判断成分配比,还建议使用程控仪,注意配制温度,一个不小心就又会影响细胞的存活效果。所以今天,小秋给各位养细胞的科研汪们带来一款细胞神器——HAKATA无血清细胞冻存液。

细胞冻存液

这是一款无血清即用型细胞冻存液,最大的特点就是无需程序降温盒及稀释,无需分步降温,直接使用!可在 - 80℃长期保存细胞、肿瘤细胞和常规细胞。冷冻细胞时,用HAKATA细胞冻存液悬浮处于对数生长期的细胞,不需预冷,直接 - 80℃冷冻保存,也可用液氮快速冷冻细胞; 复苏时用恒温箱或者水浴锅快速复苏细胞即可。不仅操作方便,更能提供稳定的冻存效果,获得更好的细胞活力。

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