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细胞污染怎么办

最近,小编的细胞总是处于无休止的污染,污染,复苏和再污染的循环中。

我相信有一个以上的童鞋有这样的麻烦,所以今天我们将讨论细胞污染的问题。

首先,您需要知道什么是细胞污染 - 任何对细胞生长有害的成分或导致细胞不纯的异物都被视为污染。根据污染源,细胞污染可分为化学污染,物理污染和生物污染。

一是化学污染

用于细胞培养的培养基用高压蒸汽灭菌。其中,血清是细胞培养中常用的培养基,血清中存在潜在的化学污染。此外,血清成分不确定,血清对不同细胞的生长有不同的影响,包括毒副作用。

二是物理污染

物理污染主要是指通过温度,振动,辐射和辐射等物理因素破坏细胞。细胞培养基等暴露于辐射或紫外光引起细胞代谢的改变。

恒温培养箱周围有设备产生机械振动,也可能对细胞生长有影响。

三,微生物污染(这是我们经常遇到的)

细菌:

常见的污染物之一,如大肠杆菌和葡萄球菌,是常见的细菌污染。细菌污染很容易找到。当培养的细胞被细菌污染时,培养液将变浑浊并且pH将改变。还有少量的培养液通过肉眼观察而没有太大变化,细菌只能在显微镜下找到。

如果您正在饲养自己的细胞,建议您每天查看它们。

解:

1)无论什么污染,只要细胞被污染,如果不是非常珍贵的细胞,丢弃并重新培养。

在这里进行再培养时,要注意自己细胞的污染状况。如果它在传递时被污染,则取决于受污染的光盘数量。如果全部污染,那么所有的东西都被更换,先取出试剂。原因是,等待您停止污染,您可以尝试使用原始试剂。

如果更换试剂或污染,则需要清洁培养箱和房间;如果是污染之一,可能是你自己操作的原因,下次需要多加注意,

通常,我们只需要在需要使用它们时提高细胞。它很少用于练习我们的手。因此,污染的第一时刻是确保下一个细胞不会污染,然后细胞被提升并慢慢找到原因。

2)如果细胞非常稀少,需要保存珍贵细胞,建议配置含有10倍双抗体PBS5倍双抗体的完整培养基。然后用10倍双抗体PBS洗涤细胞5-10次。

然后,细胞用5倍双抗体完全培养洗涤3次以上,培养后每1小时更换一次,最后培养过夜2倍双抗体培养基,替换为双抗生素完全培养基。第二天。培养,传代两次以上,如果没有发现污染,可将其冷冻,并使一些细胞在没有抗生素的培养基中继续培养超过48小时,最后确定细胞不含污染物。

菌:

其中一种常见的污染物是曲霉菌,白色念珠菌,酵母,黑霉病,孢子,并且在雨季更容易受到污染。现在我们正处于雨季,真菌也来了。

真菌生长相对缓慢,并且在疾病开始时对细胞生长没有太大影响。首先,如果只是观察细胞,可能会被忽略,但经过很长一段时间后,细胞的活力会变差。培养基是透明的,不会改变颜色。其中可以看到白色或浅黄色的浮动物体。在显微镜下还有丝状,管状,树枝状或椭圆形物质。念珠菌和酵母菌株呈椭圆形。当你看到明显的菌丝时。

解:

1)因为霉菌有孢子,所以酒精,清洁和熄灭,紫外线等不可能去除霉菌!上面的第一个,不重要,立即处理。或与其他细胞分离,更换所用的实验室设备和试剂。

2)最好防止真菌,用硫酸铜溶液擦拭CO2培养箱,并在水盘中加入饱和量的硫酸铜。

3)将饱和消毒的磷酸氢二钠高盐液加入培养箱的托盘中,以防止霉菌污染。

4)应定期(1月左右)清洁孵化器,特别是在雨季。

5)为防止霉菌污染,在培养基或放线菌素D或双抗体中加入3ul / ml两性霉素或制霉菌素。

6)最重要的是培养良好的无菌概念,避免将培养基洒入培养箱和生物安全柜。这些培养基洒在培养箱中,为细菌和真菌的繁殖提供了良好的条件。

7)如果被污染,将所有细胞从受污染的CO2培养箱中转移出来并用过氧乙酸(所有,特别是四个角落)清洗培养箱。将过乙酸置于培养箱中1小时以使蒸汽充满。在过乙酸的气味消散后,将其转移到细胞中。

8)彻底消毒环境。整个培养室用福尔马林和高锰酸钾熏蒸。用苯酚洗涤培养箱内部,包括托盘,密封2天。

9)一旦细胞被污染,就很难保存。即使使用制霉菌素或放线菌素D,它也是一种伤害敌人10,000的方法。高浓度的抗真菌剂对细胞有毒。

如果发现新的污染,pbs洗几次细胞,尽可能洗涤细菌,然后用两性霉素25ug / ml处理12-24小时,改变溶液后改变两性霉素3-5ug / ml,改变每天连续液体,连续处理2-3天后,继代培养后,稍微接种到35mm培养皿中,不含两性霉素,观察霉菌是否继续生长,剩余的传代细胞继续加入两性霉素直至不是细胞添加没有霉菌生存。 。

黑胶虫

它可以穿透过滤膜或通过空气传播。在低倍率下是黑点。黑虫可以在高放大倍数下游泳和游泳。一般来说,它不会影响太多。仍然可以使用细胞。的。通常,细胞生长状态良好,观察到的移动物体没有显着增加,并且培养基的颜色和透明度没有显着改变,并且在同一批血清培养细胞中可以发现类似的现象。它对细胞生长状态没有显着影响,并且在细胞增殖旺盛后自然消失,除了更换血清外不需要特殊处理。

 

可能的污染原因:可能有许多原因,如液体消毒,操作问题,环境问题等。

定期预防污染:

1,在培养基中加入双抗体,预防量可以,10ul / ml。然而,双抗体会影响细胞的状态,因此有必要在转染前去除双抗体并检测细胞的某些指标,以避免影响实验结果。

2,培养箱应定期或紫外线消毒,培养箱应用酒精和解结器进行检测。培养箱中的水优选为三蒸水。

3,超净平台物料提取设备培养液瓶操作必须按规定操作,不要随意操作,快速,频繁地四处走动。

4,超洁净平台的风扇不能太大,风扇要6-8格。否则也可能导致霉菌污染

5.无菌室用甲醛熏蒸后,可用相同量的氨水中和,可在约数小时内操作。

6,操作人员个人原因:这是最可预防的,在使用设备之前必须检查解决方案是否可用,是否过时,如果您是过时的,请不要冒险,请务必重新消毒或定期治疗,特别是有时没有面罩,手套,并且在操作时大声说话是最不合适的。

最后,小编想说:

细胞污染,预防是硬道理! !不要考虑补救措施,失去两者并不是一个好主意,最重要的是预防!预防!预防!

 


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