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细胞养不好必看

听说同学们的养的细胞常常因为各种原因一再受损或者死亡,今天小秋拿出毕生功力,为大家讲述细胞培养中那些你可能忽略的小细节


细胞的营养来源


针对大多数肿瘤细胞,营养配方一般为:90%合成培养基(DMEM、RPMI1640、MEM等)和10%胎牛血清(FBS);为了防止污染,可以加1%双抗!


 

常见问题解答:

Q:针对不同细胞,细胞培养基配方一样吗?如何获知呢?

A:不同细胞的培养基是不同的。在小秋家购买的细胞,针对不同细胞株,会有详细介绍,包括生长的状态图、培养基的类型等。

Q:培养基为什么一般都是偏红色?

A:因为培养基加了酚红来显示颜色,指示pH范围为6-8,颜色会由黄变为紫红。这是为了我们能更直观观察培养液的变化,如变黄,则代表偏酸,偏碱性了就显示偏紫色。一般来说,细胞吸收营养后,变黄后就暗示我们要换培养基啦!所以密切观察很重要哦!

Q:大多数细胞系可以在不止一种培养基中生长,那可以替换吗?

A:不建议更换指定的培养基,因为当培养基改变时,细胞的性质可能也会变化。

Q:若是细胞生长缓慢,是否可以增加血清比例?

A:可以!

 


 


细胞的生长环境舒适无菌的环境是细胞健康成长的基础。如下图为培养细胞的器皿,包括形状、规格、用途多样的培养瓶、培养皿及培养板。最终住进37℃,5%CO2的恒温培养箱。常见问题解答:

Q:细胞培养板规格不一,如何正确选用?
A:根据不同规格的细胞培养皿/板容量及用途,如流式一般用 6 孔,爬片一般用 24 孔,MTT 一般用 96 孔等。

Q:细胞培养皿和培养瓶区别?
A:就细胞培养状态来说,培养瓶和培养皿没有太大区别,主要在于安全系数(培养瓶>培养皿)、培养细胞数量(大培养瓶>培养皿)。但是培养瓶成本也会相对较高,因此无特殊要求,一般选择培养皿即可。


细胞的复苏与冻存
细胞复苏:指将冻存的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。复苏过程如下图所示:


 

 

常见问题解答:Q:为什么细胞复苏后,很多难以贴壁?
A:忽略培养基的问题,主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记最重要的融化速度要快,可不时摇动冷冻管,使之尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。Q:为什么细胞贴壁了,却长不起来?
A:此时需要考虑的是细胞密度问题,一些细胞倾向于维持一定的密度,若复苏的细胞生长缓慢,可将细胞转移到较小的培养瓶/皿中培养。


 

细胞冻存:将细胞放在低温环境(-70℃~-196℃),细胞内的代谢降低,可最大限度的保存细胞活力,以便长期储存。

 


 

常见问题解答:
Q:目前细胞冻存液多采用的什么配方?


A:目前细胞冻存液的配方有很多种,如培养基:血清:DMSO=7:2:1或8:1:1或5:4:1,或直接用血清:DMSO=9:1。 这里小秋推荐使用HAKATA无血清细胞冻存液,无需程序降温,细胞存活率和活力高达90%-98%,适用于干细胞冻存及无血清培养细胞。

 

Q:若没有细胞冻存盒,我们该怎么办?


A:可先将冻存管放入4℃冰箱中10min,再移至-20℃冰箱30min,-80℃冰箱2h或过夜,最后放入液氮罐内。为了节约时间,还可直接在冻存盒外包裹一团棉花,用棉花代替冻存盒缓慢降温的特点,将细胞转移至-80℃冰箱过夜,再转移至液氮保存。


Q:细胞冻存时对细胞量有要求吗?


A:细胞复苏时会有一定的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够高,起始浓度106—107个/ml/管;

 


今天的内容就到这里了,细胞培养中的细节可马虎不得,希望大家可以结合这些小技巧,将细胞养的更漂亮!


按照国际惯例,文末是时候放大招了:


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好了各位同学们,

为了能让你们毕业,小秋也是费尽了心思,

但我也只能帮你们到这里了,

至于能不能毕业,就靠你们自己了...

你们懂我意思吧?



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