细胞冻存液常用比例

1. 在冷冻保存前立即检查您的细胞培养物是否有细菌，真菌，支原体和病毒污染。在大多数情况下，污染筛选的结果将在培养物冷冻保存（10至14天）后的一段时间内获得。

2. 制备由完全培养基和5％DMSO组成的细胞冻存液。不要将未稀释的DMSO加入细胞悬浮液中，因为DMSO在水溶液中的溶解会释放出热量（放热）。

3. 通过温和离心（125xg，10分钟）收集细胞，并将它们以1×10 6至5×10 6活细胞/ ml的浓度重悬于细胞冻存液中。继续维持培养细胞直至确认回收细胞的存活率（参见步骤9）。

4. 使用细胞系的名称和日期标记适当数量的样品瓶。然后向每个小瓶中加入1至1.8ml细胞悬浮液（取决于小瓶的体积）并密封。

5. 让细胞在室温下在细胞冻存液中平衡至少15分钟但不超过60分钟。这个时间通常用于将细胞悬浮液的等分试样分配到小瓶中。60分钟后，由于DMSO，细胞活力可能下降。

6. 使用梯度降温，或者，使用可编程的冷冻装置以每分钟-1℃的速度冷却冷冻瓶，直至达到-70℃以下的温度。（推荐使用HAKATA无血清细胞冻存液，可直冻-80°C）

7. 将样品瓶快速转移至液氮或-80°C冰箱。冷冻材料将以每分钟10°C的速度升温，如果温度高于-50°C，会迅速变质。

8. 记录冻结的位置和详细信息。

9. 在-180℃下24小时后，取出一个冷冻小瓶，恢复培养中的细胞，并确定它们的活力和无菌性。