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为什么单核细胞衍生的THP-1巨噬细胞死得这么多?

我们已经用THP-1单核细胞衍生的巨噬细胞工作了几个月(以刺激胆固醇摄取),但这些细胞非常脆弱,在大多数情况下,我们没有达到足够数量的实验结束。细胞(有时,我们最终没有任何细胞)。

我们慢慢融化THP-1单核细胞,在DMEM + FBS 10%中培养7天达到融合,然后我们将它们分化为PMA 200 nM的巨噬细胞(遵循先前的文献和我们之前的测试所示)。但是,从这一点开始,它们开始逐渐死亡,特别是当它们与胆固醇(氚标记的胆固醇)接触时,但是在它们接触之后。

我不知道问题出在哪里,也许:

- PMA诱导的巨噬细胞分化不足

- 错误的文化媒体

- 洗涤太多(在整个过程中,我们用温PBS洗涤它们6次,我们更换培养基3次,以改变条件)

- 细菌污染(我不知道如何检测它)

- 过于激进的治疗(氚化胆固醇)

简而言之,THP-1单核细胞衍生的巨噬细胞通常会死得太多,或者是否有任何“实用技巧”可以用来保持它们存活和代谢活跃?有没有什么技巧可以帮助这些细胞更长寿?


从我的角度来看,在我手中,THP-1细胞绝不是脆弱的。

您必须将培养基更换为RPMI 1640.我们使用RPMI 1640(PAA目录号E15-840)补充了10%FCS Gold和0.1 mg / ml青霉素/链霉素/ L-谷氨酰胺(PAA)多年。我们用100 ng / ml PMA进行分化96小时,加上不同时期的化合物孵育。该方案工作正常,我们通过流式细胞仪仅检测少数坏死或凋亡细胞(至少不超过其他细胞)。

不太严格的洗涤也可能有帮助。我们通常在星期一和星期五分裂细胞(没有洗涤或中间变化)。

另一个重要参数是细胞密度。如果在分化期间细胞密度太小,则细胞表现不同并且不太方便处理。确保在下列密度附近种植细胞。还请注意培养基的体积是否充足。并且再次说明:在分化过程中没有洗涤和没有改变介质。

24孔培养板

每孔0.38 * 10 ^ 6个细胞

每孔2毫升培养基

6孔培养板

每孔1,5 * 10 ^ 6个细胞

每孔3毫升培养基

25cm2培养瓶

每瓶3,3 * 10 ^ 6个细胞

每瓶5ml培养基

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