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THP-1细胞在冷冻和复苏后表现得很奇怪?

THP-1细胞在冷冻和复苏后表现得很奇怪?

我想在冷冻原料瓶后对THP-1细胞有一些建议。我正在完美地培养这些细胞我使用不含抗生素的ATCC推荐培养基,以200,000细胞/ ml的速度种植它们两到三天,并以800,000细胞/ ml通过它们。我确实超过了这个数字,但是当我将它们重新接种到200,000个细胞时,它们仍然会像以前那样生长。所以在这一点上一切都很顺利。

我扩增了细胞,直到我有足够的大约20个小瓶的细胞冷冻,每瓶8.5到950万个细胞(如ATCC建议的那样)。我用血细胞计数器测量了细胞数,所以我不确定这个数字是否正确。但是细胞在含有5%DMSO的完全培养基中缓慢冷冻。

在我冻结细胞后,我读到DMSO可以将细胞分化为巨噬细胞样细胞,应该避免。我还读到,只是冻融这些细胞有时可以启动分化。无论如何,我现在解冻了两个小瓶,我注意到它们不再像以前那样表现。

他们不再像以前那样快速增长。

2.少数细胞聚集在一起。

3少数细胞已分化并附着在烧瓶表面。

我想我可能只是注意到这些行为,因为我过度焦虑并寻找它们; 他们可能在那之前,但我没有看到他们。

因此,如果有人在冻融后THP-1细胞表现出不同的问题那么请,任何建议都会非常感激吗?




您没有提到解冻后的初始细胞浓度或当前细胞数/活力。我不确定你是如何解冻它们的,但这就是我的实验室如何解冻THP-1和其他易于与DMSO区分的细胞类型。

对于一小瓶细胞,我们在水浴中快速解冻它们,并在右上方T-25烧瓶中将1ml细胞加入25-30ml培养基中。将细胞以直立位置(加盖)置于培养箱中3-4小时。这将使细胞沉降到烧瓶底部。几小时后,小心地从培养箱中取出烧瓶,取出约20ml“旧”培养基,并用5-10ml新鲜培养基替换。然后将烧瓶以直立位置返回培养箱数天。

首先,该方法允许以细胞友好的方式还原和去除DMSO。其次,通过在直立式烧瓶中培养细胞数天,使细胞保持紧密接触并改善自分泌和旁分泌信号,从而改善细胞活力和生长。几天之后,他们应该准备好去,并且可以以正常方式处理。


建议使用HAKATA无血清细胞冻存液,细胞重悬后直接放入-80°C冰箱过夜。


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