我需要解冻冻存的MCF7和T47D细胞系，但它们被冷冻超过6个月，我担心存储条件和细胞成活率，有任何最佳方案的提示？

如果将细胞保存在液氮罐中(细胞冻存)，细胞就会很好。记得要快速解冻并慢慢冷冻。

我会有一管至少14毫升的培养基，温度升至37摄氏度，为细胞做好准备。

我从LN2取一个小瓶，通过搅拌冷冻小瓶在37摄氏度的水浴中快速加热。解冻应该只需要1分钟或更短。

解冻后，用14ml培养基倒入试管中，以1000RPM离心10分钟。去除上清液。

加入1至2毫升培养基，加入1-2个T75培养瓶中，培养基中含有14毫升培养基。

这适用于1x106细胞/ T75烧瓶，如果你少用T25，总共8mls培养基。

如果它们存储在-80中与上面相同，唯一的区别可能是由于可行性百分比，首先增长需要更长的时间。

我们冻存和复苏了许多细胞类型。细胞通常培养基+血清中7.5％DMSO通常是最佳的-细胞冻存液。

在添加到细胞之前混合DMSO，因为纯DMSO在接触时杀死细胞-细胞冻存液。为了解冻细胞，最关键的步骤是稀释DMSO。

这是我们的核心方案，对于大多数细胞类型，它们具有90-98％的活力，只要它们在冻存之时是健康的并且分开良好。

回收原料：小瓶快速解冻，例如在温水浴中。通过温和移液将细胞从小瓶底部重悬浮，转移至20ml管中，并通过逐渐加入20ml含有血清的培养基稀释。

重要的是：非常缓慢地逐滴稀释。例如，在约30秒内混合（通过旋转）加入1ml，在10秒内加入1ml，然后在30秒内保持18ml。（注意，冷冻培养基是高度高渗的：超过4倍等渗。）

DMSO需要时间从细胞中扩散出来，或者它们会破裂。离心，重悬于完全培养基中并以所需密度（通常高于正常）铺板。