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细胞冻存液冻存后复苏细胞的最佳方案?

我需要解冻冻存的MCF7和T47D细胞系,但它们被冷冻超过6个月,我担心存储条件和细胞成活率,有任何最佳方案的提示?



如果将细胞保存在液氮罐中(细胞冻存),细胞就会很好。记得要快速解冻并慢慢冷冻。

我会有一管至少14毫升的培养基,温度升至37摄氏度,为细胞做好准备。

我从LN2取一个小瓶,通过搅拌冷冻小瓶在37摄氏度的水浴中快速加热。解冻应该只需要1分钟或更短。

解冻后,用14ml培养基倒入试管中,以1000RPM离心10分钟。去除上清液。

加入1至2毫升培养基,加入1-2个T75培养瓶中,培养基中含有14毫升培养基。

这适用于1x106细胞/ T75烧瓶,如果你少用T25,总共8mls培养基。

如果它们存储在-80中与上面相同,唯一的区别可能是由于可行性百分比,首先增长需要更长的时间。


我们冻存和复苏了许多细胞类型。细胞通常培养基+血清中7.5%DMSO通常是最佳的-细胞冻存液。

在添加到细胞之前混合DMSO,因为纯DMSO在接触时杀死细胞-细胞冻存液。为了解冻细胞,最关键的步骤是稀释DMSO。

这是我们的核心方案,对于大多数细胞类型,它们具有90-98%的活力,只要它们在冻存之时是健康的并且分开良好。

回收原料:小瓶快速解冻,例如在温水浴中。通过温和移液将细胞从小瓶底部重悬浮,转移至20ml管中,并通过逐渐加入20ml含有血清的培养基稀释。

重要的是:非常缓慢地逐滴稀释。例如,在约30秒内混合(通过旋转)加入1ml,在10秒内加入1ml,然后在30秒内保持18ml。(注意,冷冻培养基是高度高渗的:超过4倍等渗。)

DMSO需要时间从细胞中扩散出来,或者它们会破裂。离心,重悬于完全培养基中并以所需密度(通常高于正常)铺板。


细胞冻存液

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