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如何培养MCF-7细胞?

MCF-7培养方案:

MCF-7

使用Eagle's MEM,补充10%FBS,1%青霉素/链霉素。还可以添加非必需氨基酸(0.1 mM),胰岛素(10ug / mL)和丙酮酸钠(1mM)。向培养基中加入10nM雌激素,使细胞数增加3-4倍。在潮湿,浓缩的CO2(5%)气氛中保持37°C的温度。

一旦MCF-7细胞在平板上达到约90%汇合,通过用1xPBS冲洗两次来除去培养基和传代细胞。

向细胞中加入2-3mL温热(37℃)0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液以分散细胞层。在倒置显微镜下观察。分散应该在5到15分钟之间发生。如果细胞没有正确分离,将烧瓶放回37°C孵育室。不要孵育超过3分钟左右。注意:在分散过程中,不要通过敲击或摇动烧瓶来搅拌冷藏。当细胞脱落时,这可能导致结块。

一旦MCF-7细胞层分散(在37℃下3分钟),通过在无菌管中向10mL完全生长培养基(参见步骤1)中加入5ml细胞/胰蛋白酶-EDTA使胰蛋白酶失活。轻轻吹打吸出细胞

将细胞在125xg力下在生长培养基中离心5分钟。

从管中取出胰蛋白酶/生长培养基悬浮液。

将沉淀(MCF-7细胞)重悬于10 mL新鲜生长培养基中(参见步骤1)

1mL悬浮液加入到含有9mL原始生长培养基的每个新平板中(参见步骤1),并在37℃下在潮湿的5%CO 2气氛中孵育。

建议采用1:3或1:6的传代培养比例

如上所述,我们使用DMEM,但含有5%FBS(且不含抗生素或胰岛素)。说实话,任何生长培养基都适用于这些细胞。至于抗生素和胰岛素 - 它们是不必要的。由于历史原因,胰岛素已被包括在许多乳腺培养物中。如果您使用胰岛素与无胰岛素进行“并排”比较,您将看到没有差异(正如我们所做的那样)。此外,关于胰蛋白酶消化,我们常规使用0.05%胰蛋白酶-EDTA并在T75中加入2mL 2-3分钟,然后用全培养基中和。这一直对我们有利。

MCF-7细胞直达。


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