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胰酶的使用注意事项及配制方法

胰酶使用注意:

1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。

2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。

胰酶配制方法:

1、培养液配制,方便好用,对细胞影响小,并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解

2、生理盐水配制,要先调ph值7.2到7.4(①胰酶(1:250) 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力搅拌2-3小时,调pH 7.8-8.0,过滤除菌。)

3、pbs(0.1%胰酶溶液的配制:称取胰酶粉末0.1g,先用少许灭菌过的PBS调成糊状,然后补足到100ml。置室温搅拌4小时或冰箱内过夜,过滤灭菌,分装,4℃保存备用。); 或是hanks或是D-hanks液配制(1.称取胰蛋白酶粉末置烧杯中,先用少许D-Hanks 平衡盐溶液(pH7.2 左右)调成糊状,然后再补足D-Hanks 平衡盐溶液,搅拌混匀,置室温4 小时或冰箱过夜,并不断搅拌振荡;2.次日,先用滤纸粗滤,再进行过滤除菌,分装入瓶中,低温冰箱保存备用,常用浓度为0.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH 至7.2 左右。)

一般0.45微米的一次性滤器过滤除菌,至于作用效果,需要消化一次细胞感觉一下,因为不同厂家的酶不一样,有的作用温和,有的作用剧烈。

4、是否需要四度放置过夜,取决于你的胰酶的纯度。过去的胰酶纯度不高,所以难以溶解,需要四度过夜. 而现在的胰酶纯度都很高,就没有必要四度过夜。从理论上来说,四度放置过夜,给细菌生长的机会,尽管过滤可以出去细菌,可是出不掉其代谢产物。

胰蛋白酶不溶,有絮状物的原因,考虑有:

1、过期或是酶已经部分变性

2、溶液ph值不对

3、在没过滤之前的絮状沉淀是正常现象,因胰酶多取自动物胰腺,沉淀为组织块,过滤后即可。

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